Isolamento de Vibrio spp de camarões comercializados in natura na cidade de São Gonçalo - RJ / Isolation of Vibrio spp from shrimp commercialized in natura in the city of Sao Gonçalo - RJ

Bactérias do gênero Vibrio fazem parte da microbiota de camarões, pois têm capacidade de associar-se à quitina presente no exoesqueleto destes animais e ao zooplancton, que por sua vez são consumidos por estes animais. O gênero contém pelo menos 12 espécies patogênicas, incluindo V. cholerae, responsável por várias pandemias de cólera. A contaminação humana acontece através do consumo de alimentos, principalmente de origem marinha, crus ou mal cozidos. Por se tratar de um tipo de pescado amplamente consumido pela população, este trabalho teve como objetivo investigar a presença de espécies de Vibrio em camarões comercializados in natura na cidade de São Gonçalo-RJ. Os camarões foram adquiridos em duas peixarias da cidade e caracterizados por metodologia convencional e molecular; cento e vinte e nove amostras testaram positivamente para as provas bioquímicas realizadas e, destas, cinquenta e duas testaram positivamente para os testes moleculares. Visando investigar a identidade das espécies de Vibrio, as amostras foram submetidas ao PCR multiplex para 4 espécies (V. cholerae, V. mimicus, V. parahaemolyticus, V. vulnificus). Doze isolados foram identificados como V. parahaemolyticus e 9 como V.cholerae não O1. Dentre os demais isolados, 31 demonstram se tratar de outras espécies de Vibrio spp. O sítio com o maior número de isolados foi a casca, seguida pelo hepatopâncreas/ hemolinfa. A ribotipagem por PCR das 21 cepas demonstrou claramente a separação das cepas de V.parahaemolyticus e V.cholerae. As cepas de V. cholerae e V. parahaemolyticus demonstraram alto índice de resistência a ampicilina (83,33%) e 100% de sensibilidade à nitroflurantoína e tetraciclina. Sete cepas (38,8%) apresentaram perfil de multirresistência a dois antimicrobianos. Nossos resultados demonstram a presença de espécies patogênicas de Vibrio em amostras de pescados amplamente consumidos pela população.

Molecular investigation of tRNA genes integrity and its relation to pathogenicity islands in Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) strains

tRNA genes are known target sites for the integration of pathogenicity islands (PAI) and other genetic elements, such as bacteriophages, into bacterial genome. In most STEC (Shiga toxin-producing Escherichia coli), the PAI called LEE (locus of enterocyte effacement) is related to bacterial virulence and is mostly associated to the tRNA genes selC and pheU. In this work, we first investigated the relationship of LEE with tRNA genes selC and pheU in 43 STEC strains. We found that 28 strains (65 percent) had a disrupted selC and/or pheU. Three of these strains (637/1, 650/5 and 654/3) were chosen to be submitted to a RAPD-PCR technique modified by the introduction of specific primers (corresponding to the 5'end of genes selC and pheU) into the reaction, which we called "anchored RAPD-PCR". The PCR fragments obtained were transferred onto membranes, and those fragments which hybridized to selC and pheU probes were isolated. One of these fragments from strain 637/1 was partially sequenced. An 85-nucleotide sequence was found to be similar to the cfxA2 gene that encodes a beta-lactamase and is part of transposon Tn4555, a pathogenicity island originally integrated into the Bacteroides genome.